噻唑藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品用途及試驗步驟介紹
更新時間：2020-09-18 點擊次數(shù)：804次
噻唑藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品常用于基于MTT檢測方法的細(xì)胞活力、細(xì)胞增殖或細(xì)胞毒性檢測。因為MTT具有正電荷，它可以穿過細(xì)胞膜并被線粒體還原形成紫色甲臜染料。溶解MTT甲臜染料需要使用有機(jī)溶劑。
噻唑藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品用途：
1.藥物(也包括其他處理方式如放射線照射)對體外培養(yǎng)的細(xì)胞毒性的測定;
2.細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測定。檢測原理如上所述，根據(jù)測得的吸光度值(OD值)，來判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞活性越強(qiáng)(如果是測藥物毒性，則表示藥物毒性越小)。
實驗步驟：
1：接種細(xì)胞：用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細(xì)胞懸液，以每孔1000-10000個細(xì)胞接種到96孔板，每孔體積200ul.
2:培養(yǎng)細(xì)胞：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時間)。
3：呈色：培養(yǎng)3-5天后，每孔加噻唑藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品溶液(5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.繼續(xù)孵育4h
終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ulDMSO，振蕩10min，使結(jié)晶物充分融解。
4：比色：選擇490nm波長，在酶標(biāo)儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長曲線。
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