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　　噻唑藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品用途常用于基于MTT檢測方法的細(xì)胞活力、細(xì)胞增殖或細(xì)胞毒性檢測。因?yàn)镸TT具有正電荷,它可以穿過細(xì)胞膜并被線粒體還原形成紫色甲臜染料。溶解MTT甲臜染料需要使用有機(jī)溶劑。脫氫酶的檢測,染色法。

　　MTT，商品名稱噻唑藍(lán)

　　全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo(z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide漢語化學(xué)名為3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，一種黃顏色的染料，由于應(yīng)用于細(xì)胞存活率的檢測而被熟知。在細(xì)胞培養(yǎng)中，MTT不僅僅是一個(gè)化學(xué)物品，更是一種實(shí)驗(yàn)方法。

　　MTT原理

　　MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶標(biāo)儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。

　　噻唑藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1：接種細(xì)胞：用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔1000-10000個(gè)細(xì)胞接種到96孔板，每孔體積200ul.

　　2:培養(yǎng)細(xì)胞：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時(shí)間)。

　　3：呈色：培養(yǎng)3-5天后，每孔加溶液(5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.繼續(xù)孵育4h

　　終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ulDMSO，振蕩10min，使結(jié)晶物充分融解。

　　4：比色：選擇490nm波長，在酶標(biāo)儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長曲線。